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2025年，由中國科學院水生生物研究所負責起草，中國實驗動物學會歸口的《實驗動物斑馬魚微生物與寄生蟲等級及監(jiān)測》T/CALAS 152-2025正式發(fā)布。

該標準適用于實驗用普通級斑馬魚和無特定病原體級斑馬魚的病原等級及監(jiān)測。同時，規(guī)定了普通級斑馬魚和無特定病原體級斑馬魚的病原等級、監(jiān)測指標、程序、方法、結(jié)果判定和報告等。

01 標準編寫背景

斑馬魚因性成熟周期短、繁殖可控、體外受精、體外發(fā)育、胚胎透明、管理方便等特點，被廣泛應(yīng)用于生命科學、健康科學、環(huán)境科學、水產(chǎn)科學等研究領(lǐng)域，是國際上應(yīng)用范圍最廣的實驗魚類。我國斑馬魚研究雖起步較晚但發(fā)展飛速，研究體量全球占比自2020年起連續(xù)五年全球第一，是名副其實的斑馬魚研究大國。在此期間，不僅斑馬魚實驗室數(shù)量快速增加，同行間品系交流的數(shù)量也急劇增長，帶來了管理不規(guī)范、引入多種病原和病原快速傳播等問題。與其同時，世界范圍內(nèi)都普遍存在缺乏病原分級與規(guī)范，缺少無特定病原體(SPF)斑馬魚等問題。我國于2020年底頒布《實驗動物實驗魚質(zhì)量控制》(GB/T 39649-2020)國家標準，但病原學等級及檢測標準尚不夠完善，也未對排除特定病原級斑馬魚進行規(guī)定。因此，開展實驗斑馬魚微生物與寄生蟲等級及監(jiān)測標準研制工作，規(guī)范實驗用普通級斑馬魚和SPF級斑馬魚的病原等級及監(jiān)測，對于提高實驗用斑馬魚質(zhì)量、提高科研結(jié)果的準確性、確保實驗人員安全以及應(yīng)對公共衛(wèi)生風險非常重要。

02 標準主要內(nèi)容解讀

1. 術(shù)語和定義

普通級斑馬魚 Conventional (CV) zebrafish，不攜帶所規(guī)定的對魚和(或)人健康造成嚴重危害的病原體和動物烈性傳染病病原體的斑馬魚。

無特定病原體級斑馬魚 Specific pathogen free (SPF) zebrafish，除普通級斑馬魚應(yīng)排除的病原體外，不攜帶對科學實驗干擾大的特定病原體的斑馬魚。

2. 斑馬魚分級病原檢測項目

動物等級應(yīng)排除的病原微生物檢測要求主要檢測部位

無特定病原級普通級細菌病原致病性嗜水氣單胞菌virulent Aeromonas hydrophila (vAh)●內(nèi)臟

海分枝桿菌Mycobacterium marinum●內(nèi)臟

寄生蟲病原多子小瓜蟲Ichthyophthirius multifiliis●鰭、鰓

細菌病原鮰愛德華氏菌Edwardsiella ictaluri●腦、內(nèi)臟

柱狀黃桿菌Flavobacterium cloumnare●鰭、鰓

無乳鏈球菌Streptococcus agalactiae●腦、內(nèi)臟

海豚鏈球菌Streptococcus iniae●腦、內(nèi)臟

寄生蟲病原嗜神經(jīng)假洛姆蟲Pseudoloma neurophilia●腦

注：● 必須檢測指標，要求陰性

3. 病原選擇及等級設(shè)定

病原選擇和等級設(shè)定主要綜合考慮以下7方面：①普通級和SPF級斑馬魚的定義;②國家現(xiàn)行法律法規(guī)的要求;③生物安全;④國內(nèi)現(xiàn)有斑馬魚實驗動物相關(guān)標準;⑤國內(nèi)實驗斑馬魚微生物和寄生蟲病的流行病學情況;⑥檢測方法的標準以及檢測實驗室的硬件條件;⑦適用性和前瞻性。

在國家水生生物種質(zhì)資源庫國家斑馬魚資源中心(以下簡稱CZRC)現(xiàn)有的斑馬魚流行病學調(diào)查數(shù)據(jù)中，國內(nèi)實驗室常見斑馬魚病主要表現(xiàn)有豎鱗病、爛鰓、爛尾、腹水、頭頂穿孔、出血、潰瘍腐皮、游動異常等。在已知病原中細菌性病原最為常見，占比75.8%，寄生蟲類病原占比5.8%，未在實驗室斑馬魚中發(fā)現(xiàn)病毒感染癥狀或檢出病毒性病原。

在普通級病原選擇中，主要考慮有較多報道且人魚共感染的兩種細菌病原：致病性嗜水氣單胞菌(virulent Aeromonas hydrophila (vAh))和海分枝桿菌(Mycobacterium marinum)，以及經(jīng)過正常魚房管理和動物來源管理后不應(yīng)出現(xiàn)在斑馬魚魚房中的寄生蟲病原多子小瓜蟲(Ichthyophthirius multifiliis)。在SPF級病原選擇中，主要考慮對實驗魚類生存危害較大和對實驗數(shù)據(jù)產(chǎn)生嚴重干擾的四種細菌性病原和一種寄生蟲病原：鮰愛德華氏菌(Edwardsiella ictaluri)，柱狀黃桿菌(Flavobacterium cloumnare)，無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)，海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)和嗜神經(jīng)假洛姆蟲(Pseudoloma neurophilia)。

4. 檢測方法

在本標準研制過程中，對實驗斑馬魚病原的檢測首先選擇有國家標準或行業(yè)標準的檢測方法。對于未見于已有相關(guān)標準的病原——鮰愛德華氏菌，或現(xiàn)有國家標準中僅有形態(tài)學檢測，無分子檢測方法的——嗜神經(jīng)假洛姆蟲，本標準使用由國家斑馬魚資源中心建立，經(jīng)三家單位驗證有效的檢測方法。

03 總結(jié)

該標準的制定可推動不同地區(qū)、不同系統(tǒng)實驗室所使用的斑馬魚質(zhì)量穩(wěn)定，增加實驗結(jié)果的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，提高檢測數(shù)據(jù)的認可度;從而促進斑馬魚相關(guān)研究領(lǐng)域的發(fā)展，為研究成果的產(chǎn)業(yè)化成果轉(zhuǎn)化鋪平道路。

來源：中國斑馬魚信息中心