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靈長類獸醫(yī)協(xié)會(APV，Association of Primate Veterinarians)意識到在非人類靈長類動物(NHP，Non-human primate)中，腦脊液(CSF，Cerebro-Spinal Fluid)的采集可能對于臨床和生物醫(yī)學(xué)研究都是必需的。由于這項技術(shù)存在固有風(fēng)險，實驗動物獸醫(yī)應(yīng)確定腦脊液采集對臨床評估的必要性和實用性。為了生物醫(yī)學(xué)研究目的而進行腦脊液采集須在動物護理和使用委員會(IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee)或等同的監(jiān)管機構(gòu)批準(zhǔn)下進行。以下建議為IACUC、使用非人類靈長類動物模型的研究人員以及獸醫(yī)人員提供基本信息，以供在制定腦脊液采集相關(guān)的政策和標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP，Standard Operating Procedure)時予以考慮。>>>商務(wù)洽談，點此處，在線咨詢
背景
腦脊液分析是一種強大的工具，可加強對中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)發(fā)生的各種過程的檢測，例如：出血、炎癥、感染、腫瘤和其他臨床情況。此外，對腦脊液中化合物(如激素、藥物、神經(jīng)遞質(zhì)、生物標(biāo)志物、代謝產(chǎn)物和病毒)進行系列評估，在基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化研究中同樣非常重要。中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的腦脊液體積可通過腦脊液的分泌和吸收而維持穩(wěn)定。
操作注意事項
腦脊液通常通過腦池或腰椎間隙穿刺采集。其中，通過腰椎穿刺采集腦脊液的并發(fā)癥風(fēng)險相對較低。因為在大多數(shù)非人類靈長類動物中，腰椎穿刺位點遠離脊髓的末端。應(yīng)適當(dāng)麻醉動物，并使用無菌技術(shù)進行操作，包括剃毛等術(shù)部準(zhǔn)備和無菌材料的使用。至少需使用無菌手套、注射器和針頭，還可考慮使用無菌手術(shù)創(chuàng)巾。腦脊液采集通常以側(cè)臥位、胸骨臥位或坐位進行，分別通過頸部或脊柱的屈曲來改善對腦池的進入或擴大椎間隙(Gereschlager，1987;Magden，2015;Wolf，2012)。選擇的針頭尺寸和長度應(yīng)適合非人類靈長類動物的種屬和體型(Brady，2000;Cereschlager，1987;Magden，2015;Wolf，2012)。操作時使用的技術(shù)、設(shè)備和耗材，以及圍手術(shù)期的護理因動物種屬、研究目的和臨床獸醫(yī)的偏好而不同。
有些研究方案可能需隨時間推移而連續(xù)采集腦脊液，或需采集未麻醉的受試對象的腦脊液樣本。對于這些方案，可通過長期植入的腦脊液穿刺導(dǎo)管從清醒狀態(tài)的恒河猴身上連續(xù)采集腦脊液，而該導(dǎo)管可連接至皮下的采集接入口(Gilberto，2003;Gilberto，2022;MacAllister， 2016)。在編寫本文件時，作者盡一切努力尋找總腦脊液體積的數(shù)值、硬腦膜穿刺的次數(shù)限制或建議、采集頻率、安全的抽取體積以及腦脊液補充速率相關(guān)的最新參考文獻。對于大多數(shù)靈長類動物，這方面的文獻很有限。此外，采集方法也各不相同，因為從靈長類獸醫(yī)協(xié)會成員收集的調(diào)查結(jié)果表明，各機構(gòu)均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因此，作者根據(jù)現(xiàn)有的最佳證據(jù)提供了腦脊液采集的考慮因素和建議。
作為參考，先前的研究已確定成年雄性恒河猴(8.0-10.6kg)的表觀腦脊液體積為10+/-0.06 mL，腦脊液流速為0.018+/-0.003 mL/min(McCully，2020)。恒河猴的腦脊液形成速率范圍為28.6-44.2 μL/min(Curran，1970;Lux，1975;Martins，1977)。在這方面需要對非人靈長類動物進行進一步的研究，以促進更具指導(dǎo)性建議的制定。
潛在不良反應(yīng)
雖然在非人類靈長類動物中進行腦脊液采集時報道的并發(fā)癥很少，但解剖變異以及不適當(dāng)或技術(shù)不佳的操作方法可能導(dǎo)致樣本受損或并發(fā)癥，如出血，腦疝，感染，腦干、脊髓或神經(jīng)根損傷以及動物的不適。這些并發(fā)癥雖然罕見，但可能會損害動物福利。
由于存在風(fēng)險，應(yīng)由獸醫(yī)或經(jīng)過培訓(xùn)的獸醫(yī)人員采集腦脊液。對于未成功的腦脊液采集嘗試，實踐可能有所不同。常見做法是允許一個人進行最多三次未成功的嘗試。在第三次嘗試失敗后，應(yīng)由另一位合格的人員接替。如果第二個人在三次嘗試后仍無法采集到腦脊液，則停止嘗試。同時動物將接受適當(dāng)?shù)逆?zhèn)痛治療，并從麻醉中恢復(fù)。在嘗試失敗后更換采集部位(例如從腦池到腰椎)通常可成功。如果是未進行成像的失敗嘗試，則可使用X線透視輔助穿刺針放置。除提高成功率外，影像引導(dǎo)還可降低創(chuàng)傷性穿刺的發(fā)生率。(Eskey，2001)
術(shù)后監(jiān)測應(yīng)持續(xù)進行，直到動物返回其籠內(nèi)，并能在沒有支撐的情況下保持直立姿勢。對動物的監(jiān)測應(yīng)該至少持續(xù)24小時或根據(jù)IACUC批準(zhǔn)的方案進行。監(jiān)測應(yīng)包括對基本的生理、行為和運動參數(shù)的評估。尤其應(yīng)評估動物是否出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙的跡象，包括但不限于嗜睡、抑郁、昏迷和頭部壓迫感等。在人類醫(yī)學(xué)中，腦脊液采集后出現(xiàn)的頭痛和由此引起的顱內(nèi)低壓并不少見。考慮到非人類靈長類動物中的這種潛在后遺癥，應(yīng)在手術(shù)時給予鎮(zhèn)痛治療，并延長2-3天，或根據(jù)與頭痛或脊柱疼痛相關(guān)行為的術(shù)后觀察結(jié)果按需提供鎮(zhèn)痛治療。最有效的鎮(zhèn)痛方案可能是術(shù)前即開始綜合治療。
IACUC注意事項和記錄保存
IACUC應(yīng)了解腦脊液采集的相關(guān)工作以及所有可能的并發(fā)癥，并至少每年對其審查。所有相關(guān)信息，如藥物劑量、術(shù)前準(zhǔn)備、采集的腦脊液體積、采集頻率以及術(shù)后短期和長期恢復(fù)情況，均應(yīng)在IACUC方案中進行描述，并在醫(yī)療記錄或?qū)嶒炇胰罩局羞m當(dāng)?shù)赜涗洝ＤX脊液可能是研究方案中的關(guān)鍵資料，但如果采集技術(shù)不恰當(dāng)，可能會對動物福利產(chǎn)生影響。遞交方案時，應(yīng)提供采集次數(shù)和頻率的科學(xué)依據(jù)。
具體而言，IACUC還應(yīng)仔細評估涉及腦脊液采集的每個提案，并考慮以下問題：
1.腦脊液采集是否對實現(xiàn)方案中所述的科學(xué)目標(biāo)至關(guān)重要?
2.是否有替代方法和侵入性較小的中樞神經(jīng)系統(tǒng)評價方法(如成像技術(shù))可供選擇，如果有，是否考慮過?
3.操作人員是否接受過適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)并具備足夠的技能?
4.是否將提供適當(dāng)?shù)膰中g(shù)期麻醉和鎮(zhèn)痛方案?有關(guān)麻醉和鎮(zhèn)痛計劃，應(yīng)咨詢實驗動物獸醫(yī)。
5.采集的腦脊液體積是否符合動物的年齡和體型考慮?
6.腦膜穿刺的次數(shù)和頻率是否適合動物，以及并發(fā)癥風(fēng)險是否已降到最低?如果多次采集腦脊液為研究的一部分，應(yīng)明確規(guī)定每只動物的最大采集次數(shù)。
7.術(shù)后監(jiān)測計劃是否適當(dāng)?
8.是否考慮了所有可能的術(shù)后并發(fā)癥，并列出了所有合理的干預(yù)方法，包括安樂死?
來源：實驗動物那些事兒公眾號
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